免疫組化技術要點和常見問題

在免疫組化過程中，為了更好的說明問題和查找原因，設置陽性對照片（已知的高表達相應抗原的組織）和陰性對照組織片（不加一抗但是加二抗系統/不加任何抗體兩組），所有操作過程應*一致。
染色弱或者沒有染色（按照先后順序，先排除一些簡單的原因）：

試劑使用順序錯誤或者漏加試劑重復實驗，保證每一步均正確
二抗和一抗不匹配選擇匹配的二抗
底物和酶不匹配選用匹配的底物
酶失活換用新的酶（將酶和底物混合，看是否顯色？）
組織中沒有待測抗原表達或者表達水平低使用陽性對照片
抗體濃度太低增加抗體濃度.使用不同濃度的抗體，決定*濃度
抗體孵育時間不充分延長抗體孵育時間
底物孵育不充分延長底物孵育時間
抗體儲存不當，導致失效將抗體分裝，低溫保存 （-20 to -70 C） ，避免反復凍溶。稀釋抗體在4保存1-2周，避免時間過長。或者根據說明書進行恰當的保存
一抗失效換用新的一抗
二抗失效換用新的抗體（能否成功與其它一抗配合？）
脫石臘不充分延長脫臘時間或者換用新的二甲苯
組織固定不充分或者不當增加固定時間或者改用不同的固定方法
組織固定過度減少固定時間。若已固定過度，則需使用正確的或者推薦的抗原修復方法
復染試劑與底物系統不匹配選擇正確的復染試劑（不加復染劑，看是否有組織染色？）
封片劑不正確選擇正確的封片劑