脂質體2000轉染試劑的應用越來越廣泛，下面我們來說說使用脂質體2000轉染試劑時需要注意什么。
　　脂質體2000轉染試劑操作注意事項：
　　1、轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。
　　2、對于每孔細胞，使用50μl無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA。3、對于每孔細胞，使用50μlOPTI-MEMⅠ培養基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內同稀釋的DNA混合。保溫時間過長會降低活性。）注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用D-MEM培養。如果D-MEM做為Lipofectamine2000的稀釋液，必須在5分鐘內同稀釋的DNA混合。
　　4、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘。 注意：溶液可能會混濁，但不會影響轉染。復合物可以在室溫保持6小時穩定。
　　5、直接將復合物加入到每孔中，搖動培養板，輕輕混勻。注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為0.5ml無血清培養基。
　　6、在37℃，5％的CO2中保溫24-48小時，無須去掉復合物或更換培養基或者在4-5小時后更換生長培養基也不會降低轉染活性。
　　7、在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩定表達，在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩定表達需要數天或數周。
　　8、對于96孔板培養，不再需要提前一天進行細胞鋪板，而可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低。快捷的步驟和蛋白表達細胞系的轉染使得Lipofectamine2000非常適用于96孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。