培養基的制備方法及基本原則

    培養基一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養料。不用的培養基的成分不同，但是步驟卻大徑相同。

    培養基的制備方法

    1.配料

    配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

    2.溶解

    淀粉溶解：少量冷水調成糊狀

    加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

    3.調PH

    用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。

    4.過濾

    濾紙或棉花進行過濾。（有時可以省去）

    5.分裝

    一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

    （1）三角瓶

    若作靜置培養，則100ml培養基/250ml的三角瓶，zui多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15-20ml培養基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

    （2）試管分裝

    液體培養基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；

    固體斜面培養基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

    6.包扎

      分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

    7.滅菌

    按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

    8.擺斜面

    滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

    9.貯存

    培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。

    培養基配置原則

    1、選擇適宜的營養物質

    所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由于微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求是不一樣的，因此首先要根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。

    2、營養物質濃度及配比合適

    培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好，營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需，濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用，例如高濃度糖 類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長，反而起到抑菌或殺菌作用。另外，培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長 繁殖和（或）代謝產物的形成和積累，其中碳氮比（C/N）的影響較大。

    3、控制pH條件

    培養基的 pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的zui適pH條件各不相同，一般來講，細菌 與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是，在微生物生長繁殖和代謝過程中，由于營養物質被分 解利用和代謝產物的形成與積累，會導致培養基pH發生變化，若不對培養基pH條件進行控制，往往導致微生物生長速度下降或（和）代謝產物產量下降。因此， 為了維持培養基pH的相對恒定，通常在培養基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。

    4、控制氧化還原電位（redoxpotential）

    不同類型微生物生長對氧化還原電位（F）的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長，一般以+0.3一+0.4V為宜，厭氧性微 生物只能在F值低于+0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸，在+0.1V以下時進行發酵。F值與氧分壓和pH有關， 也受某些微生物代謝產物的影響。在pH相對穩定的條件下，可通過增加通氣量（如振蕩培養、攪拌）提高培養基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養 基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。

    5、原料來源的選擇

    在配制培養基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養基成分，特別是在發酵工業中，培養基用量很大，利用低成本的原料更體現出其經濟價值。

    滅菌處理

    要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。